La pintura es un buen ejemplo del retrato de corte español y sigue el modelo establecido por Antonio Moro (1519-1576) que siguió su discípulo Sánchez Coello, Villandrando, Pantoja de la Cruz o Bartolomé González. La retratada es la cuarta esposa de Felipe II, hija de su hermana María, emperatriz de Alemania, y su de esposo el emperador Maximiliano II, primo del rey español. Doña Ana nació en Cigales, provincia de Valladolid, en 1549. Se casó en Segovia en 1570 y murió en Badajoz en 1580. Fue madre del rey Felipe III. La reina viste un suntuoso traje de seda blanco bordado en oro.
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