La femme au centre représente la Vierge Marie, mère du Christ et mère de l’Eglise. L’enfant, debout à sa droite, est saint Jean-Baptiste qui représente le lien entre l’Ancien et le Nouveau Testament car il est considéré comme le dernier des prophètes et le premier des saints. Le livre est la Bible ; l’Agneau est le symbole du Christ, agneau immolé mais vainqueur du péché par sa Résurrection.
L’une des clés de lecture de ce tableau s’explique par sa datation. En effet, il a été peint peu après le Concile de Trente qui entérine les réformes de l’Eglise catholique après les remises en question du protestantisme. Dans ce cas, l’Eglise ancienne, c'est-à-dire l’homme barbu, symbolise l’Eglise catholique d’avant les réformes, tandis que la femme agenouillée symbolise la nouvelle Eglise qui renaît à la suite du Concile.