Stephanus was door de apostelen aangesteld als diaken (geestelijk dienaar). Hij preekte en verrichtte wonderen, en geldt als de eerste martelaar van het christendom. Hij werd gestenigd omdat hij de hogepriesters beschuldigde van moord op de Messias. Ondanks het kleine formaat verbeeldt Rembrandt de bruutheid van het drama indringend. Diverse stenengooiers belagen Stephanus, die al bijna onder het geweld bezweken is.